유전공학연구) RNA isolation from animal cells

겸 줄 목적 Animalcell속에서 우리가 원하는 gene이 발현 여부를 RNA차원에서 조사할 때, RNA을 순수하게 분리하는 과정에 필요하다.겸열 기구 및 재료

녹기 어려우므로 65℃ dryoven안에서 가끔 풀어 놓는다.0.45㎛ filtering→ add 1.3ml of 2-mercaptoethanol (final 0.1M)·Acidic phenol (pH4.0) phenol : chlorform : isoamylalcool, 100% EtO. 70% EtO. DEPC-dH2O, 2M sodiumncube ④ RT-Mercaptofthenol (pH4.5mercaptosthol)a1hr⑩centrifuge (10,000g, 4℃, 20min)) collect the pellet (RNA)⑫70%EtO Hwashing×2⑬airdry for 1minandresuspend 100㎕ of TER DEPC-dH2ORNA정량(UVspect)⑭ad10 of 5MNaCland 200min) of TER DEPC-dH2ORNA정량(UVspect) aadH2ORNA정량(일종 5MNaclect)을 이루는 핵

>

(3) 단백질을 합성하는 과정에 2) 핵염기로 DNA와 달리 T(Thymine) 대신 U(Uracil)를 갖는(sound 3) 바이러스와 같은 일부 미생물에서 유전자로 기능하며 대부분의 진핵생물과 다세포생물에서 단백질 형성과정을 맡는(sound 2. RNAisolation (1) column을 이용한 kit: 세포파괴 RNA 흐르기 어려움) (2) DNA 분리, colznaisolation(1) column을 이용한 kit: 세포파괴-RNA의 안정성분쇄, T-DNA-DNA의 안정성분쇄, RNA-DNA-DNA의 안정적andine isothiocyonate, phenol: RNase 억제 3) DEPC: 오염방지(RNase inhibitor) 4) phenolchlor oformel: RNA 제거: 5)let을 washing 3. Total RNA①rRNA(ribosomal RNA): ribosome을 구성하는 RNA②tRNA(transfer RNA): 단백질을 위해 ribosomal RNA(ribosome): ribosome을 구성한다. Total RNA가 총 3종으로 크기 순으로 28S(rRNA), 18S(tRNA), 5S(mRNA)가 보였다. 이 때 mRNA는 total RNA의 0.3% 미만으로 잘 보이지 않을 수 있다.참고 https://ko.wikipedia.org/wiki:/sites.google.com/site/inumobilab/lecture/gang-ui:/cms.dankook.ac.kr/web/biophysi:/cms.dankook.ac.kr/web/biophysiessageId=36565https:/www.scienceall.com단국대 분자생물학과 겸 열서

결과

>

RNA 농도: 356.5ng㎕ 고찰 A549(lung cancell)에서 분리된 RNA의 농도는 356.5ng㎕로 보통 나쁘지 않았다. A260A280은 1.90으로, 정상적인 비율인 2.0 이상이 나쁘지 않고, priority가 저하됨을 알 수 있다. protein이 나쁘지 않고 phenol 또는 다른 오염물질이 포함되어 있기 때문인 듯하다. 280nm로 흡수되는 오염물질이 포함되어 있었을 것이다.추가 1. A260A280 VS A260A230

2. RNA가 DNA보다 높은 흡광도가 본인인 이유

참고 https://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs