유전공학연구) RNA isolation from animal cells

겸 줄 목적 Animalcell속에서 우리가 원하는 gene이 발현 여부를 RNA차원에서 조사할 때, RNA을 순수하게 분리하는 과정에 필요하다.겸열 기구 및 재료

녹기 어려우므로 65℃ dryoven안에서 가끔 풀어 놓는다.0.45㎛ filtering→ add 1.3ml of 2-mercaptoethanol (final 0.1M)·Acidic phenol (pH4.0) phenol : chlorform : isoamylalcool, 100% EtO. 70% EtO. DEPC-dH2O, 2M sodiumncube ④ RT-Mercaptofthenol (pH4.5mercaptosthol)a1hr⑩centrifuge (10,000g, 4℃, 20min)) collect the pellet (RNA)⑫70%EtO Hwashing×2⑬airdry for 1minandresuspend 100㎕ of TER DEPC-dH2ORNA정량(UVspect)⑭ad10 of 5MNaCland 200min) of TER DEPC-dH2ORNA정량(UVspect) aadH2ORNA정량(일종 5MNaclect)을 이루는 핵

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(3) 단백질을 합성하는 과정에 작용 2) 핵염기로 DNA와 달리 T(Thymine) 대신 U(Uracil)를 갖는(sound 3) 바이러스와 같은 일부 미생물에서 유전자로 기능하며 대부분의 진핵생물과 다세포생물에서 형성과정을 맡는(sound 2. RNAisolation (1) column을 이용한 kit: 세포파괴 RNA 흐르기 어려움) (2) DNA 분리, colznaisolation(1) column을 이용한 kit: 세포파괴-RNA의 안정성분쇄, T-DNA-DNA의 안정성분쇄, RNA-DNA-DNA의 안정적andine isothiocyonate, phenol: RNase 억제 3) DEPC: 오염방지(RNase inhibitor) 4) phenolchlor oformel: RNA 제거: 5)let을 washing 3. Total RNA①rRNA(ribosomal RNA): ribosome을 구성하는 RNA②tRNA(transfer RNA): 단백질을 만들기 위해 ribosomal RNA(ribosome): ribosome을 구성한다. Total RNA가 총 3종으로 순으로 28S(rRNA), 18S(tRNA), 5S(mRNA)가 보였다. 이 때 mRNA는 total RNA의 0.3% 미만으로 잘 보이지 않을 수 있다.참고 ko.wikipedia.org/wiki:/sites.google.com/site/inumobilab/lecture/gang-ui:/cms.dankook.ac.kr/web/biophysi:/cms.dankook.ac.kr/web/biophysiessageId=36565https:/www.scienceall.com단국대 분자생물학과 겸 열서

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RNA 농도: 356.5ng㎕ 고찰 A549(lung cancell)에서 분리된 RNA의 농도는 356.5ng㎕로 보통 나쁘지 않았다. A260A280은 1.90으로, 정상적인 비율인 2.0 이상이 나쁘지 않고, priority가 저하됨을 알 수 있다. protein이 나쁘지 않고 phenol 또는 다른 오염물질이 포함되어 있기 때문인 듯하다. 280nm로 흡수되는 오염물질이 포함되어 있었을 것이다.추가 정보 1. A260A280 VS A260A230

2. RNA가 DNA보다 높은 흡광도가 본인인 이유

참고 www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs